09-22 科研记录 实验教程 Western Blot 实验教程 面向首次做WB者，文章梳理从细胞/组织总蛋白制备、SDS-PAGE、湿转、封闭、抗体孵育到ECL显影和灰度分析的主线。核心是理解原理并控制细节：SDS-PAGE按分子量分离，转膜须胶靠黑膜靠红，二抗按一抗宿主选择，磷酸化用BSA封闭；样品低温加抑制剂，BCA定量后等量上样，曝光多档，仅用未饱和条带定量并以内参归一化。WB可比较蛋白有无和相对表达变化，不能单独证明定位、结合或精确倍数。新手应记录参数、一次只改一个变量，用阳性对照和丽春红排查失败。 26 0 0
09-11 科研记录 实验教程 骨肉瘤细胞传代操作教程（143B&U-2OS&K7M2） 143B、U-2 OS与K7M2骨肉瘤细胞传代要点：汇合度80%–90%、对数生长期传代，宁早勿晚，连续培养不超过20–30代。三株培养基不可互换，U-2 OS用McCoy’s 5A，143B用EMEM并补BUdR，K7M2用DMEM。无菌下经PBS润洗、胰酶消化、镜下判断终点、培养基终止、离心或稀释、台盼蓝计数后分瓶；U-2 OS胰酶敏感，K7M2消化需5–15分钟且勿拍打摇晃。还应防支原体、记录代次，人源细胞做STR鉴定。 30 0 0
